Tinción de Gramm

La tinción de Gramm (coloración) es un tipo de coloración usado en microbiología para ver las bacterias, sobre todo en muestras clínicas. Christian Gramm desarrolló esta técnica y por ello su nombre (1884). Se ocupa para poder hacer referencia a morfología celular bacteriana. Se considera la bacteria Gramm postiva que se ven de color violeta, y la bacteria Gramm negativa se visualiza de color rosa.

Aplicación

-Recoger muestras
- el extendido en espiral
-Dejar secar a temperatura ambiente
-Fijar la muestra con metanol durante un minuto o al calor (flameado 3 veces aprox.)
-Agregar azul violeta (cristal violeta o violeta de genciana) y esperar 1 min. Todas las células gram positivas y gram negativas -se tiñen de color azul-purpura.
-Enjuagar con agua.
-Agregar lugol y esperar entre 30 segundos y 3 minutos
-Enjuagar con agua.
-Agregar acetona y/o alcohol y esperar entre 15 y 20s
-Enjuagar con agua.
-Tinción de contraste agregando safranina o fucsina básica y esperar 1-2 min Este tinte dejará de color rosado-rojizo las bacterias Gram negativas.
-Enjuagar con agua.
-Para observar al microscopio óptico es conveniente hacerlo a 100x con aceite de inmersión

Explicación
El cristal violeta penetra en todas las células bacterianas (tanto Gram positivas como Gram negativas). El lugol está formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio) disuelto en agua destilada, el cual está presente para solubilizar el yodo. El I2 entra en las células y forma un complejo insoluble en solución acuosa con el cristal violeta.
La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloración, ya que en la misma es soluble el complejo I2/cristal violeta. Los organismos Gram positivos no se decoloran, mientras que los Gram negativos sí lo hacen.
De esta forma las bacterias Gramm positivas como dije anteriormente se coloran lila, y las negativas color rosa-rojizo.