viernes, 30 de abril de 2010

ADN semiconservativa
ADN semiconservativo 2

Matthew Meselson y Francis Stahl, crearon un expermineto llamado el “experimento más hermoso de la biología molecular” en 1958. Esto apoya y respalda a la hipótesis de Watson y Crick. Meselson y Stahl usarón el isótopo del nitrogeno, el nitrógeno 15 (N15) lo ocuparon sobre la incoporación de ese elemento durante la replicación de ADN en generaciones de bacterias Escherichia coli. Mostraron que cuando el ADN se duplica, cada una de sus cadenas pasa a las células hijas sin cambiar y estás sirven de molde para formar una segunda hebra y completar así las dos doble cadenas.

Meselson y Stahl cultivaron esta bacteria (E.coli) en un medio que contenía un isótopo de nitrógeno pesado N15. Pensaron que como el nitrógeno es necesario para la formación de las bases que componen el ADN, cuando las bacterias se vayan a duplicar, su genoma contendría N15. Luego de varias duplicaciones en presencia de N15sacaron una muestra de esas bacterias y las cultivaron en presencia de nitrógeno liviano (N14) durante el tiempo que sea necesario para que solo haya una duplicación. Tomaron una muestra y permitieron otra duplicación celular. Después, hicieron crecer las bacterias desde el comienzo solo con un medio que tenía N14.

Cuando tuvieron las cuatro muestras provenientes de las distintas porciones de cultivo (N15 solamente; N15 y N14 durante una generación; N15 y N14 por dos generaciones, y N14 solamente) aislaron el ADN de cada muestra y lo separaron de acuerdo con su densidad mediante centrifugación en gradiente. ¿Qué encontraron?

Tubo 1: sólo una banda correspondiente a N15
Tubo 2: una banda de densidad intermedia entre la anterior y la de N14
Tubo 3: 2 bandas: una igual a la intermedia y otra como la de solo N14
Tubo 4: sólo una banda correspondiente a N14
¿Qué había pasado? Las bacterias que crecieron en presencia de N15 o de N14 solamente, contenían en su ADN sólo uno de estos isótopos.

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